荧光抗体技术是近年发展起来的一门广泛用于现代生物学和医学的新兴技术，它利用荧光物标记抗体来进行抗原定位，示踪以及含量测定 ，具有传统技术不可比拟的优势，已经在免疫学，生物学以及临床检验等诸多方面得到广泛运用。 将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合,形成荧光素-蛋白质结合物(即荧光标记抗体)此结合物在荧光显微镜下呈现出一种特异性荧光。

荧光抗体标记技术

标记技术

1.测定标记前的抗体浓度
2.超滤未标记前的抗体溶液，除去抗体保存液里不利于标记的甘油等物质
3.测定换液后的蛋白浓度，并根据此浓度计算出标记所需要的染料体积
4.进行蛋白标记
5.从反应液中分离标记蛋白
6.测定反应液的OD280和荧光素对应的OD值计算标记效率
7.把标记好的抗体转移到抗体保存液里。 8.避光低温保存(标记抗体4°C避光可保存6个月，分装成小包装在零下20'°C可长期保存)

 
激发波长和发射波长
荧光素介绍
荧光标记   λEX-λEM (nm) 激发源 (nm) 可替代标记
AF350 346-442 UV AMCA, DyLight 350
AF405 401-421 405 Cascade Blue, DyLight 405
AF488 493-519 488 ATTO488, Cy2, DyLight488, FAM, FITC, Fluorescein
AF555 555-565 532, 543, 546, 555, 568 ATTO550,Cy3, DyLight 549,TRITC
AF594 591-614 532, 543, 546, 555, 568 ATTO594, DyLight 594, Texas Red, Cy3.5
AF647 651-667 633, 635, 640 ATTO 647N, Cy5, DyLight 649
AF680 679-702 680, 685 Cy5.5, DyLight680, IRDye 680LT
AF750 749-775 680, 685 Cy7, DyLight750, APC-AF 750, IRDye 750
荧光标记优势

荧光一抗优势
1.直接免疫染色省去了二抗孵育和清洗的步骤，避免二抗作用背景，操作方便，节省时间。
2.容许来自同一物种的多个抗体同时使用进行多色检测，可以使用来自同一物种的抗体进行动物组织染色，从而避免了二抗的交叉反应。
3.显色更明显，成片效果更好
 
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