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产品名称Hoechst33342/PI双染试剂盒
1、 染色缓冲液的配制:根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取 100μL 试剂 C 加 900μL 无菌去离子水稀释,混匀即成染色缓冲 液。 2、 收集样本细胞,细胞数量在 10X105 个以内。 3、 用 PBS 洗涤细胞两次。 4、 用 500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬。 5、 加入 5-10ul Hoechst33342 染色液 A。 6、 加入 5-10ul PI 染色液 B。 7、 轻轻混匀后 4℃避光孵育 10-20 分钟。 8、 用 PBS 洗涤细胞。 9、 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。HO33342 用紫外光激发,PI 用蓝光激发。Hoechst33342-DNA 复合物的最 大激发波长为 350nm,最大发射波长为 460nm,PI-DNA 复合物的最大激发和最大发射波长分别为 488nm 和 615nm。
Hoechst33342/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。Hoechst33342染色液A可以透过正常细胞膜,而细胞凋亡后,细胞膜对Hoechst33342染色液A的通透性增加,PI染色液B不能透过细胞膜,对正常细胞和凋亡细胞不能染色,而对坏死细胞可以染色。用两种染色液对细胞进行双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜即可对细胞状态进行检测。在双变量流式细胞仪的散点图上,这三群细胞表现分别为:正常细胞为低蓝色/低红色(A+/B+),凋亡细胞为高蓝色/低红色(A++/B+),坏死细胞为低蓝色/高红色(A+/B++)。
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