1、 染色工作液的配制:
根据样品数用 PBS 将 Hoechst 染色液 10 倍-100 倍稀释,配制成染色工作液。
2、 细胞涂片的制备:
贴壁细胞,可将盖玻片放于培养器皿中,让培养细胞长于玻片上,然后用药物诱导细胞凋亡后取出,用 4%多聚
甲醛固定 5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞,用药物诱导细胞凋亡后,1000-2000rpm 离心 5 分钟收集细胞,用 PBS
洗 2 次,收集调整细胞数为 1X105
/ml,涂片或用离心涂片,用 4%多聚甲醛固定 5min;
3、 用 PBS 洗涤涂片两次。
4、 加适量染色工作液于涂片上,室温避光染色 5-20 分钟。
5、 用 10 倍稀释的试剂 B 洗涤涂片。
6、 用荧光显微镜检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发波长为 350nm,最大发射波长为 461nm