A. 细胞样品
1. 收集 2-5×106 个细胞,在 4℃,500×g 条件下离心 2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细
胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入 100μl 冷的裂解缓冲液,高速涡旋振荡 15 秒。
4. 置冰上 15 分钟,每隔 5 分钟高速涡旋振荡 15 秒。
5. 在 4℃,500×g 条件下离心 5 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B. 组织样品
1. 取适量组织样本剪碎,按照 50mg/100μl 冷的裂解缓冲液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或
用液氮研磨),冰上静置 15 分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在 4℃,500×g 条件下离心 5 分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上或-80℃冰箱保存备用。