产品名称植物核蛋白提取试剂盒

1. 提取液制备：
每 300ul 提取液 B 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200-500mg 植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入 1ml 提取液 A 后用
匀浆机充分匀浆或者用匀浆器充分匀浆。
【注】：
匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
培养细胞直接收集细胞后用 Dounce 匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液 A 混匀后直接进行以下步骤离心。
处理叶片等组织样本如果没有匀浆机，也可先加少量提取液 A 后用匀浆器充分匀浆后再加提取液 A 混匀。
3. 将匀浆用 100um 细胞筛过滤。
【注】：
液体量少时可以加入 1-2ml PBS 混匀后再用细胞筛过滤。
没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液静置 1 分钟，待大的没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。
部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将 1ml 吸头的口剪掉一点再吸。
4. 将滤液在 200g 条件下离心 3 分钟，弃沉淀，收集上清。
5. 在 1000g 条件下离心 10 分钟，弃上清，收集沉淀。
6. 在沉淀中加入 200-300ul 提取液 B，充分混匀。
7. 置振荡器 2-8℃振荡 30 分钟。
【注】：
用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
没有低温振荡条件可以不振荡，在 2-8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
8. 在 4℃，12000g 条件下离心 15 分钟。
9. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
建议用 BCA 法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。
蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。