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产品名称超敏型(飞克级)ECL化学发光试剂盒
使用方法: 使用注意事项: ECL 工作液配制过程中发光液A 和发光液B时务必更换吸头,工作液新鲜配制后立即使用,放置过久会影响灵敏度。 根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。 曝光时间过长会使背景加深,曝光不足会导致条带模糊。 如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL 发光和曝光。 应使用高质量保鲜膜。 1. 使用合适的方法进行 Western,直至用 PBST 洗涤二抗。 2. 新鲜配制 ECL 工作液:试剂 A 和试剂 B 按 1:1 混合后,混合后即为 ECL 工作液。须立即使用! 3. 印迹膜蛋白面朝上,用 ECL 工作液均匀滴加至印迹膜室温孵育 1-2 分钟。ECL 工作液使用量大约为 0.125ml/cm2 膜或根据个人实验习惯使用。 4. 用平头镊夹住印迹膜,垂直置于吸水纸以吸去多余工作液。 5. 快速将印迹膜置于二层保鲜膜之间,尽量赶尽气泡。 6. 将印迹膜蛋白面朝上,放于 X 光胶片暗盒内。在暗室内放入 X 光片,曝光,显影。
免疫印迹最重要也是最后一步就是酶与底物反应进行检测,本试剂盒以化学荧光发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上, 以一抗及辣根过氧化物酶HRP 标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP 标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL 工作液,在可见光下室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X 光片曝光暗盒。然后转入暗室将X 光胶片压在膜上曝光数秒到数分钟至数小时。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X 光胶片上。也可不进行X 光胶片曝光直接对印迹膜进行荧光CCD 扫描。
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