荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料,可以结合细胞内的蛋白质。CFSE在结构上将酚羟基部位改造成AM 体,所以自身不发荧光,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,进入细胞内的CFSE 的AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合,固定在细胞内,不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的荧光最强。
在细胞分裂增殖过程中,CFSE 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面。CFSE 标记细胞的荧光非常均一,优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26,并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中,CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,荧光强度变为亲代细胞的一半,通过流式细胞仪(FL1 通道)根据荧光强度的不同,可检测出未分裂细胞,分裂一次(1/2 的荧光强度),二次(1/4 的荧光强度),三次(1/8 的荧光强度),以及更多分裂次数的细胞。CFSE 可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFSE 标记的细胞可用于体外和体内增殖研究,且具有不会使邻近细胞染色的功能。
CFSE 标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久,它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。CFSE 毒性小,不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单,且不用放射性同位素,不存在安全隐患。可以更快速,更准确和更安全地得到想要的实验数据。
CFSE 标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测,也可以用于成纤维细胞、NK 细胞等其它细胞的增殖检测。
CFSE 标记细胞呈绿色荧光,荧光波长:λex=496 nm, λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为516nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL1detection channel。CFSE 标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外,还可用荧光酶标板定量活细胞数目,或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。