使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含 EDTA,根据需要可自行加入。
1. 提取液制备:每 500ul 酵母蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 50ml 酵母培养物,在4℃,2500g 条件下离心 5-10 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集酵母沉淀。
3. 用冷 PBS 洗涤酵母两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 100ul 体积酵母沉淀物中加入 500ul 冷的酵母蛋白提取液,混匀后,在室温-37℃条件下于摇床混匀振荡
30-60分钟。
5. 在 4℃,14000g条件下离心 15 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到酵母总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注:
细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
建议用BCA法进行蛋白定量。
蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。