1. 染色工作液配制:
根据样本数量,用检测缓冲液将 MDC 荧光染料 10 倍稀释,再用相应的培养基或者 HBSS 缓冲液 40-200 倍
稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量 37℃预热的含 MDC 探针工作液。于生长状态下孵育 15
分钟-1 小时(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)利用新鲜培养基或 PBS 替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1)离心,吸除上清。
2)利用 37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育 15 分钟~1 小时(具体时间需根据细胞类型
而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液或 PBS 重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察或流式检测。
3. 观察结果:
在荧光显微镜(含合适滤片)/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。
最大激发/发射波长为 335/518 nm。