细胞蛋白提取
1. 提取液制备：每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物和 2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后
置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，1000rpm 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入 500ul 冷的蛋白提取液，混匀后，在 4℃条件下振荡 15-20 分钟。
5. 在 4℃，14000rpm 条件下离心 15 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用 BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织蛋白提取
1. 提取液制备：每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物和 2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀
后置冰上备用。
2. 取 100mg 组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在 4℃，10000rpm 条件下离心 5 分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品。
5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
①用液氮研磨的方法更佳。
Yes
