使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
植物组织样本:
1、提取液准备:每 500ul 冷的提取液中加入 4ul 蛋白稳定剂和 2ul 蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。
2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200mg 鲜嫩植物组织样本剪碎,采用以下一种方法处理:
a) 加入 500ul 提取液 A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。
b) 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入 500μl 冷的提取液 A。
c) 加入 500ul 提取液 A 直接置冰上研磨。
3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或 4℃冰箱静置 1 小时。
4、在 4℃,12000rpm 以上条件下离心 10-15 分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
注:
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞样本:
1、提取液准备:每 500ul 冷的提取液中加入 4ul 蛋白稳定剂和 2ul 蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。
2、细胞用 PBS 洗涤 2 次。
3、加入细胞体积 5-10 倍体积的蛋白提取液,振荡 1 小时。
4、在 4℃,12000rpm 以上条件下离心 10-15 分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
注:
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本:
1、 冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。
2、 冻存细胞样本中直接加入 5-10 倍体积的蛋白提取液,振荡 30 分钟。
3、 在 4℃,12000rpm 以上条件下离心 15 分钟。
4、 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
注:
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。