1、 离心收集悬浮细胞。离心机 300-500g 力，2-8°C，离心时间 5 分钟，弃培养基。
【注】： 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管
或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。
贴壁细胞用不含 EDTA 的胰酶消化后离心，收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防损伤细胞膜，引起假阳性。
2、 用冷 PBS 洗涤细胞两次。（300g-400g，2-8°C，离心时间 5 分钟收集细胞）。
3、 用 400ul 1X Annexin V 结合液悬浮细胞，浓度大约为 1-5 X 106 cells/ml。
4、 取 100ul 细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-APC 染色液，轻轻混匀后于 2-8°C 避光条件下孵育 5-10 分钟。
5、 加入 5-10ul 7-AAD 染色液后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 1-3 分钟。
6、 加入 400ul PBS，轻轻混匀。
7、 立即用流式细胞仪检测。
【注】：染色完成后要尽快上机检测，因为细胞在 Annexin V 结合缓冲液中存活时间不会太长。
Yes
