1. 离心收集悬浮细胞。离心机 300-500g 力,2-8°C,离心时间 5 分钟,弃培养基。(贴壁细胞用不含 EDTA 的
胰酶消化后离心,收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防损伤细胞膜,引起假阳性)。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次。
3. 用 400ul 1X Annexin V 结合液悬浮细胞,浓度大约为 1 X 106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC 染色液,轻轻混匀后于 2-8°C 避光条件下孵育 15 分钟。
5. 加入 3-5ul 7-AAD 染色液后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟。
6. 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。