使用方法
1. Cy SE 标记蛋白（常规方法）
（1）制备染料储存液
室温预热一管 1 mg 的 Cy SE，在管中加入适量的无水 DMSO 或 DMF（不含胺），配制浓度为 10 mM 的染料储存
液。适当条件下，可以涡旋以便充分溶解染料。如果使用更微量的蛋白进行标记反应，那么染料需要稀释至更低
浓度。注：剩余的染料储存液应于-20°C 低温存放，以备后续使用。
如果使用无水 DMSO 配制染料储存液，那么染料至少可以保存一个月。
（2） 计算染料用量
Cy SE 染料用量[mg] = 8 ×标记蛋白质量×Cy SE 染料分子量
/标记蛋白分子量
注：8，染料蛋白摩尔比，是一个实验经验值，适用于常规的蛋白、多肽标记。
（3） 用 pH 8.3-8.5 的缓冲液重悬待标记蛋白
推荐使用 pH 8.3 的 0.1 M 碳酸氢钠溶液，或者 0.1 M 磷酸盐缓冲液，蛋白浓度控制在 1-10 mg/mL 时的标记
效果较好。注意 pH 控制在 8.3-8.5 之间。避免使用含有胺的缓冲液（有时可以使用 Tris，但不推荐使用）。
注：当进行大规模标记（几百毫克 SE）时，注意由于 SE 的水解，混合物随时间趋于酸化。需要监测 pH 值，或
使用更浓的缓冲液。
(4)将染料加入蛋白溶液中，并涡旋混匀，冰上过夜或室温反应至少 4 h。
(5)选用适当方法纯化染料-蛋白共轭物
凝胶过滤是普遍使用的一种大分子物质纯化的方法，另外，也可以选择沉淀或色谱法分离提纯，针对蛋白或核酸
的纯化，也可选择乙醇或丙酮沉淀的方法。
(6)计算染料-蛋白共轭物浓度染料-蛋白共轭物浓度的确定可通过以下公式计算：
C(mg/mL) = {[A280 -(Amax× Cf)]/1.4} × 稀释因子
a.C 是指染料-蛋白共轭物浓度；
稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；
b. A280 和 Amax 分别是指在 280 nm 处的吸光度以及在吸收波长处的吸光度；
c. Cf 是校正因子；
注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大，因此需要稀释至约 0.1 mg/mL。稀释倍数需要从起
初抗体量 以及蛋白液洗脱的总体积来进行预估。
（6） 结合比例（DOL）计算
DOL 通过下式计算：
DOL = (Amax× Mwt × 稀释因子)/(ε × C)
a. Amax，稀释因子，C 值在（6）中已经明确；
b. Mwt 是指蛋白的分子量；
c. ε 是 Cy SE 的消光系数；
DOL 值会上下波动，但也能得到很好的实验效果。
2. 活体成像领域
（1） 实验动物准备
根据实验需求准备需要活体成像的动物，动物分组、阴性对照、阳性对照根据具体实验设置。
（2） 成像
通过尾静脉注射、皮下注射、原位移植等方法接种 Cy Dye SE 或 Cy Dye SE 标记的生物分子或药物于动物
体内。根据实验要求选择成像时间，对实验动物全身或局部部位进 行荧光扫描，记录动物体内发射荧光的成像
图片，分析荧光 复合物（探针、药物）的分布情况。成像结束后，根据实验 需要，选择是否需要解剖内脏进行
成像分析。
注：a. 实验动物于成像前 6 h 开始禁食，以降低因胃肠道食物引起的背景干扰。
b.最佳用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试剂等条件优化。
